自Seager(1969)首次报道犬的冷冻精液成功受胎以来，国外学者对犬精液冷冻技术进行了较深入研究(Kosiniak et al,1992; Thomas et al, 1993)，而国内学者主要对德国牧羊犬精液冷冻技术进行了较深入研究（王力波等，1991；刘海军等，1998）。张嘉保等（1994）通过对德国牧羊犬冷冻精子超微结构的研究证明，冷冻使犬精子的质膜、顶体及线粒体最易受到损害。Oettle(1986)也报道了犬精液冷冻保存后精子顶体受到不同程度损害。

    西藏獒犬是我国珍贵特有的“斗犬”，也是很受欢迎的肉用犬，近几年国内学者（王力波等，未发表）对西藏獒犬冷冻精液技术进行了研究，通过人工授精以改良本地犬，提高本地犬的产肉率。有关西藏獒犬精子超微结构的研究国内、外尚无报道，本研究运用透射电镜技术对西藏獒犬精子的超微结构进行了观察，为犬科动物精子生物学和精液冷冻保存技术的深入研究提供基础资料。..

    1 材料和方法..

    1.1 精液来源..

    由哈尔滨特产研究所提供2头份冻精。用tris─柠檬酸─果糖稀释液稀释后，装入0.5ml塑料细管，平衡2h，然后用液氮熏蒸10min，投入液氮，制做成0.5ml细管冻精。冻精细管在41℃水解冻10s，两份精液冻后活力都为0.6，精子密度5×107]ml。将解冻后的精液分别用3%戊二醛溶液固定，然后保存在4℃冰箱中。..

    1.2 透射电镜观察样品的制备..

    将固定的精子悬液于试管中离心5min（4000r/min），弃去上清液，取适量精子团块用琼脂包埋，用0.1mol.. ... L.. -1.. 磷酸缓冲液冲洗3次。1%锇酸固定2h。酒精逐级脱水，放入丙酮1次。618包埋。LKB超薄切片机切片，醋酸铀和硝酸铅双染，日立H─600型电镜观察，拍照。..

    2 观察结果..

    2.1 西藏獒犬精子的超微结构..

    电镜下观察，西藏獒犬的精子由头、颈和尾构成。精子头部正面纵切呈卵圆形（见图1），长约4.62μm，宽约3.13μm；矢面纵切呈楔形，宽约0.66μm，顶端尖，尾端粗，核由高电子密度的染色质构成，其形状与头部大致相同，充满了头的大部分，核内未见空泡。核的前端被顶体覆盖，占头部近3/4。顶体的前部较后部略宽厚，称顶体帽（也称核前帽）；顶体内、外膜间呈中电子密度的顶体内容物；顶体后部有一高电子密度的薄层状致密的赤道段（也称赤道板或顶体领），覆盖头部近1/4。头部后端，赤道段紧接下来为核后帽，与细胞质膜紧贴，与染色质之间有一不规则的空隙。头部下端有一向内凹陷的窝，为植入窝（见图3、图4）。..

    颈部位于头与中段之间，这个区域很短，长约0.88μm，直径约0.63μm。内含中心粒和节柱，通过植入窝与头部相连（见图4）。..

    尾部中段前连颈部，后接主段，长约7.9μm，横切面近圆形，直径约0.83μm。中段最主要特征是质膜内层存在线粒体鞘，线粒体呈螺旋状紧密排列在一起，呈香肠形镶嵌连接，大小不尽一致。线粒体螺旋为42～49转（平均为45转）（见图1）。中段横切可见外周线粒体嵌合数2～24个（平均为7个）（见图5）；纵切面可见线粒体横切面呈念珠形排列在长轴两侧，直径约为0.17μm（见图1）。线粒体包裹9束外致密纤维，其中4条略粗大，

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